2009 - Gisely Cristiny Lopes
Ph.D. Dissertation
Autor/author: Gisely Cristiny Lopes
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - Universidade Estadual de Maringá
Área do Conhecimento: Farmacognosia
Data de Defesa: 20 de março de 2009
Orientador: Prof. Dr. João Carlos Palazzo de Mello
Banca examinadora: Prof. Dr. João Carlos Palazzo de Mello
Prof. Dr. Cid Aimbiré de Moraes Santos
Prof. Dra. Maria Raquel Marçal Natali
Prof. Dr. Marcos Luciano Bruschi
Prof. Dra. Marli Mirian de Souza Lima
Título: Estudo Químico, Desenvolvimento de Metodologia Analítica e Avaliação da Estabilidade de Extratos de Guazuma ulmifolia Lam. (Sterculiaceae)
Resumo: Guazuma ulmifolia Lam. (Sterculiaceae), popularmente conhecida como “mutamba”, é uma planta de distribuição tropical encontrada a partir do México até o sul da América do Sul. Na medicina popular de vários países latino-americanos, é usada para o tratamento de queimaduras, diarréia, inflamações e na alopecia. A partir da casca de G. ulmifolia, nove compostos foram isolados e identificados, entre eles: ent-catequina, epicatequina (EP), ent-galocatequina, epigalocatequina, epiafzelequina-(4β → 8)-epicatequina, epicatequina-(4β → 8)-catequina (PB1), epicatequina-(4β → 8)-epicatequina (PB2), epicatequina-(4β → 8)-epigalocatequina, e o novo compostos 4′-O-metil-epiafzelequina. A análise do extrato semipurificado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi realizada utilizando coluna C18 (Phenomenex®, modelo Gemini, 5 μm) como fase estacionária, a 30 ºC, com uma vazão de 0,8 mL/min, a 210 nm. Os principais parâmetros de validação do método foram avaliados. Para a análise de correlação linear, curvas analíticas foram construídas com intervalos de 20,00-150,00 mg/mL para a procianidina B2 (PB2) e 10,00-110,00 mg/mL para a epicatequina (EP). Os coeficientes de correlação da análise de regressão linear ficaram entre 0,9981-0,9988, e os limites de detecção foram entre 2,89 e 2,54 mg/mL. O conteúdo de PB2 e EP foram determinadas com sucesso, com boa reprodutibilidade e boa recuperação. A exatidão do método foi de 103,00 e 104,01%, respectivamente para PB2 e EP. A fim de avaliar o comportamento de seus constituintes químicos frente a variações de temperatura e umidade, realizou-se um estudo preliminar de estabilidade. As propriedades físico-químicas e de compatibilidade do extrato com a presença ou não de dióxido de silício coloidal, foram determinadas durante 21 dias de armazenamento sob condições forçadas de temperatura (45±2 °C) e umidade (75±5%). A alteração máxima no conteúdo de EP foi observada em 21 dias no extrato seco + dióxido de silício coloidal. Análise térmica (TG) foi realizada para estabelecer parâmetros de compatibilidade com o excipiente, e mostrou que o dióxido de silício coloidal pode contribuir com a estabilidade o extrato seco das cascas de G. ulmifolia.
Palavras-chave: Guazuma ulmifolia, Sterculiaceae, proantocianidinas, CLAE, método de validação, estabilidade, análise térmica.
Title: Chemical study , Analytical Methodology Development and Evaluation of stability of Guazuma ulmifolia Lam. (Sterculiaceae) extracts.
Abstract: Guazuma ulmifolia Lam. (Sterculiaceae), popularly known as “Mutamba”, is a tropical-American plant found from Mexico to southern South America. In the popular medicine of several Latin-American countries, it is used for the treatment of burns, diarrhea, inflammations and alopecia. From the bark of G. ulmifolia, nine compounds were isolated and identified: ent-catechin, epicatechin, ent-gallocatechin, epigallocatechin, epiafzelechin-(4β→8)-epicatechin, procyanidins B1 and B2, epicatechin-(4β→8)-epigallocatechin, and the new compound 4′-O-methyl-epiafzelechin. Its structure was elucidated on the basis of spectral and literature data. HPLC analysis of the semipurified extract was performed using a Phenomenex® Gemini RP C18 column (5 µm) as stationary phase, at 30 ºC, with a flow rate of 0.8 mL min-1, at a wavelength of 210 nm for detection and determination. The main validation parameters of the method were also determined. Calibration curves were found to be linear, with ranges of 20.00–150.00 µg mL−1 procyanidin B2 (PB2) and 10.00–110.00 µg mL−1 epicatechin (EP). The correlation coefficients of linear regression analysis were between 0.9981–0.9988, and the detection limits were between 2.89 and 2.54 µg mL-1. The contents of PB2 and EP were successfully determined, with satisfactory reproducibility and recovery. Recoveries of the PB2 and EP were 103.00 and 104.01%, respectively. The method was successfully applied to the determination of procyanidins in bark of G. ulmifolia. The preliminary stability of the dried extracts from bark of G. ulmifolia containing or not colloidal silicon dioxide (CSD) was evaluated. The physical–chemical properties and compatibility of CSD in the extract were evaluated for 21 days of storage under stress conditions of temperature (45±2 °C) and humidity (75±5%). Thermal analysis (TG) was supplemented using a selective high-performance liquid chromatography (HPLC) for determination of stability of the characteristic constituents (chemical markers), namely PB2 and EP. The results showed that PB2 is an appropriate compound to use as chemical marker in control quality of dried extracts of G. ulmifolia. The stress study showed that there was no significant difference between the two extracts. On the other hand, considering the TG data and the high temperatures involved, the results suggest that CSD would be increase the stability of dried extracts of G. ulmifolia.
Keywords: Guazuma ulmifolia, Sterculiaceae, proanthocyanidins, HPLC, validation method, stability test, thermal analysis.
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