2018 - Taísa Dalla Valle Rörig Ribeiro
MSc. Thesis
Autor/author: Taísa Dalla Valle Rörig Ribeiro
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - Universidade Estadual de Maringá
Data de Defesa: 31 de agosto de 2018
Orientador: Prof. Dr. João Carlos Palazzo de Mello
Banca examinadora: Prof. Dra. Mara Lane Carvalho Cardoso
Prof. Dr. Cláudio Roberto Novello
Título: Fração aquosa de Barbatimão: Avaliação de sua composição química e atividade biológica em células de Neuroblastoma Humano SH-SY5Y.
Resumo: Stryphnodendron adstringens, popularmente conhecida como barbatimão é uma planta típica do cerrado brasileiro que apresenta em suas cascas altos índices de polifenóis, representado principalmente por taninos condensados, do tipo prodelfinidinas e prorobinetinidinas que foram identificados a partir da fração acetato de etila originada de um extrato acetona:água, no entanto 78% do extrato bruto (EB) é representado pela fração aquosa (F2) que não possui estudos que a tenham caracterizado química ou biologicamente. Diversos estudos demonstram que o consumo de plantas ricas em polifenóis diminuem a incidência de doenças neurodegenerativas na população, dentre elas a doença de Alzheimer (DA), que é a principal causa de demência no mundo, representando cerca de 60 a 80% dos casos. Os tratamentos disponíveis atualmente tratam somente a sintomatologia da doença, portanto a descoberta de novos medicamentos que tratam ou que previnam a DA faz-se necessária. O objetivo desse trabalho é caracterizar quimicamente a fração aquosa e avaliar in vitro sua atividade protetora frente ao peptídeo βA25-35 em linhagem de neuroblastoma humano (SH-SY5Y). Para identificar os compostos presentes na fração aquosa foi realizado as análises por LC-DAD-MS e Ressonância Magnética Nuclear de carbono (RMN de 13C). Por meio das análises de viabilidade celular pela técnica do brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e vermelho neutro foi avaliada a citotoxicidade, e a proteção da fração aquosa em linhagem de neuroblastoma humano, frente à droga indutora de dano βA25-35. A análise de massas demonstrou que as subfrações da F2 apresentam em sua composição substâncias fenólicas, como taninos e cromonas. Na avaliação da citotoxicidade pelo ensaio de MTT a fração aquosa demonstrou diminuir a viabilidade da linhagem celular de neuroblastoma em concentrações acima de 0,48 e 31,25 μg/mL no período de 24 e 48 h, respectivamente. Na técnica de vermelho neutro as concentrações que diminuíram a viabilidade das células foram 0,97 μg/mL em 24 h e 3,90 μg/mL no período de 48 h, e não protegeu as células contra os danos causados pela droga βA25-35. Até o momento pode se concluir que a fração aquosa é uma matriz muito complexa e dificulta o isolamento e identificação de suas substâncias. Nas avaliações in vitro a fração demonstrou citotoxicidade em baixas concentrações e não desempenhou atividade protetora contra os danos causados pela βA em linhagem de neuroblastoma SH-SY5Y.
Palavras-chave: Barbatimão; Stryphnodendron adstringens; taninos condensados, Doença de Alzheimer.
Title: Barbatimão aqueous fraction: Evaluation of its chemical composition and biological activity in human neuroblastoma cells SH-SY5Y
Abstract: Stryphnodendron adstringens, popularly known as barbatimão is a typical plant of Brazilian cerrado that presents in its barks high levels of polyphenols, represented mainly by condensed tannins of the type prodelphinidins and prorobinetinidins that were identified from the ethyl acetate fraction originated from an acetone: water extract, however 78% of the crude extract is represented by aqueous fraction (F2) which does not have chemical characterization studies. Several studies show that the consumption of plants rich in polyphenols decrease neurodegenerative disease in the population, among them the Alzheimer disease (AD), which is the leading cause of dementia in the world, accounting for about 60 to 80% of cases, and so far, remains unhealed, so the discovery of new drugs that treat or prevent AD is necessary. The aim of this work is the chemical characterization of the aqueous fraction and the in vitro evaluation of its protective activity against the βA25-35 peptide in human neuroblastom line (SH-SY5Y). The chemical analyses of F2 were performed by LC-DAD-MS and Nuclear Magnetic Resonance Carbon (13C NMR). The cytotoxicity and the protection of the F2 in neuroblastoma lineage were evaluated through the cellular viability analyzes by the 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide (MTT) and Neutral Red human, against the drug inducing βA25-35 damage. Mass analysis showed that F2 may have phenolic compounds, such as tannins and chromones. In the evaluation of cytotoxicity by the MTT assay the F2 was shown to decrease the viability of the neuroblastoma cell line at concentrations above 0.48 and 31.25 μg/mL in the 24 and 48 h, respectively. In the neutral red technique the concentrations that decreased the viability of the cells were 0.97 μg/mL in 24 h and 3.90 μg/mL in the 48 h, and did not protect the cells against damage caused by the βA25-35 drug. To date it may be concluded that the F2 is a very complex matrix which makes it difficult to isolate and identify its compounds. In in vitro evaluations the fraction demonstrated cytotoxicity at low concentrations and did not perform protective activity against the damage caused by βA in SH-SY5Y neuroblastoma line.
Keywords: Barbatimão; Stryphnodendron adstringens; condensed tannins; Alzheimer’s disease.
Dissertação PDF: clique aqui
