2018 - Mariana Nascimento de Paula

MSc. Thesis

Autor/author: Mariana Nascimento de Paula

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - Universidade Estadual de Maringá

Data de Defesa: 24 de janeiro de 2018

Orientador: Prof. Dr.  João Carlos Palazzo de Mello

Banca examinadora:  Prof. Dr. Celso Vataru Nakamura

                               Profa. Dra. Rita de Cássia Ribeiro Gonçalves

Título: Estudo bioguiado de extratos de folhas de Maytenus ilicifolia frente Helicobacter pylori

Resumo: Maytenus ilicifolia Mart. ex. Reissek, é membro da família Celastraceae, conhecida popularmente como espinheira santa, cancorosa, espinheira de deus, espinheira divina, quebrachilho, salva vidas, entre outros. No Brasil é muito utilizada para tratamento de úlceras gástricas, no entanto em comunidades indígenas e rurais é utilizada por apresentar propriedades analgésica, antitumoral, afrodisíaca, antiespasmódica, contraceptiva, antiulcerogênica, diurética e cicatrizante. Este trabalho teve como objetivo realizar a avaliação da qualidade da matéria prima vegetal, utilizando metodologias estabelecidas, com posterior preparo de extratos brutos e frações e avaliação de sua atividade frente Helicobacter pylori e antioxidante. Foram produzidos cinco extratos utilizando como líquido extrator em proporção v/v: água (EB 1); etanol: água 50:50 (EB 2); etanol: água 70:30 (EB 3); etanol: água 96:4 (EB 4) e acetona: água 7:3 (EB 5). Cada extrato foi particionado com acetato de etila e n-butanol, resultando em: cinco frações aquosas (FAQ 1-5); cinco frações acetato de etila (FAE 1-5) e cinco frações n-butanólica (FnB 1-5). Cada extrato e fração foi testado quanto sua capacidade antioxidante e sua atividade anti-H. pylori. O extrato que apresentou maior rendimento foi o EB 2 com 24,35% e concentração de epicatequina de 15,54 mg/g extrato. A melhor atividade anti-H. pylori foi observada no EB 5, FAE 2, FAE 5 e FnB 5, sendo que as CIM estavam entre 64-128 µg/mL. A maior taxa de inibição da enzima urease foi observada na FAE 2, FAE 5, FnB 2 e FnB 5 e esteve entre 37,27-47,08%. Para o ensaio de DPPH (IC₅₀) os resultados variaram entre 14,51–98,35 µg/mL, sendo que o melhor resultado foi da FAE 4. Para o ensaio de FRAP os resultados dados em TEAC foram semelhantes, variando de 0,77–5,40 mM de trolox/g de extrato, sendo o melhor resultado da FAE 2. Pela análise dos extratos por espectrometria de massas foi possível determinar a presença de compostos fenólicos como (epi)catequina, procianidinas B1 e B2 e flavonoides glicosilados. Assim foi possível a identificação de alguns compostos presentes nas folhas de M. ilicifolia, atestar a capacidade antioxidante de alguns extratos, bem como a atividade anti-H. pylori.

Palavras-chave: Maytenus ilicifolia, espinheira santa, Helicobacter pylori, capacidade antioxidante, taninos condensados, flavonoides glicosilados.

Title: A bioguided study of leaf extracts of Maytenus ilicifolia against Helicobacter pylori

Abstract: Maytenus ilicifolia Mart. ex. Reissek, is a member of the Celastraceae family, popularly known as espinheira santa, cancorosa, espinheira de deus, espinheira divina, quebrachilho, salva vidas, among others. In Brazil it is widely used for the treatment of gastric ulcers, however in indigenous and rural communities it is used for its analgesic, antitumor, aphrodisiac, antispasmodic, contraceptive, antiulcerogenic, diuretic and healing properties. The objective of this work was to evaluate the quality of the vegetal raw material, using established methodologies, with subsequent preparation of crude extracts and fractions and evaluation of its activity against Helicobacter pylori and antioxidant capacity. Five extracts were produced using v/v proportion: water (EB 1); ethanol: water 50:50 (EB 2); ethanol: water 70:30 (EB 3); ethanol: water 96: 4 (EB 4) and acetone: water 7: 3 (EB 5). Each extract was partitioned with ethyl acetate and n-butanol, resulting in: five aqueous fractions (FAQ 1-5); five ethyl acetate fractions (FAE 1-5) and five n-butanolic fractions (FnB 1-5). Each extract and fraction were tested for its antioxidant capacity and anti-H. pylori activity. The extract with the highest yield was EB 2 with 24.35% and epicatechin concentration of 15.54 mg/g extract. The best anti-H. pylori activity was observed in EB 5, FAE 2, FAE 5 and FnB 5, with MICs being between 64-128 μg/mL. The highest inhibition rate of the urease enzyme was observed in FAE 2, FAE 5, FnB 2 and FnB 5 and was between 37.27 - 47.08%. For the DPPH assay (IC₅₀) the results ranged from 14.51 - 98.35 μg/mL, the best result being from FAE 4. For the FRAP assay the results given in TEAC were similar, ranging from 0.77 - 5.40 mM trolox/g extract, being the best result of FAE 2. The extracts analysis by mass spectrometry allowed to determine the presence of of phenolic compounds as (epi)catechin, procyanidins B1 and B2, and glycosylated flavonoids. So, it was possible to identify some compounds present in the leaves of M. ilicifolia, attest to the antioxidant capacity of some extracts as well as the anti-H. pylori activity.

Keywords: Maytenus ilicifolia, espinheira santa, Helicobacter pylori, antioxidant capacity, condensed tannins, glycosylated flavonoids.

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