2010 - Fernanda Giacomini Bueno
MSc. Thesis
Autor/author: Fernanda Giacomini Bueno
Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - Universidade Estadual de Maringá
Área do Conhecimento: Farmacognosia
Data de Defesa: 01 de outubro de 2010
Orientador: Prof. Dr. João Carlos Palazzo de Mello
Banca examinadora: Prof. Dra. Elaine Rosely Lepri
Prof. Dra. Gisely Cristiny Lopes
Título: Controle de qualidade, desenvolvimento de metodologia analítica e avaliação da atividade cicatrizante de Caesalpinia peltophoroides BENTH
Resumo: Caesalpinia peltophoroides Benth., conhecida como sibipiruna, é uma planta muito utilizada para arborização nas cidades brasileiras. Este trabalho objetivou o estudo farmacognóstico, capacidade antioxidante e o teor de taninos do extrato bruto (EB) e de frações semipurificadas (FAE, FQ e F1-F5), o desenvolvimento de metodologia analítica por espectrofotometria UV/VIS, além da atividade cicatrizante das cascas do extrato bruto de C. peltophoroides em feridas cutâneas de ratos Wistar. O controle de qualidade foi realizado através da perda por dessecação (PD), teor de cinzas (TC), teor de extrativos (TE) e teor de resíduo seco, com álcool 100% (TR1), álcool 70% (TR2) e álcool 50% (TR3). Para a determinação de taninos totais (TT) utilizou-se a reação com Folin-Ciocalteu. A capacidade antioxidante foi determinada pelo método de DPPH, avaliando-se o IC50 (μg/mL). O desenvolvimento da metodologia analítica seguiu os requisitos exigidos pela RE nº 899/2003 -ANVISA. A atividade cicatrizante foi analisada aos 4, 7, 10 e 14 dias de tratamento com gel contendo 1% do EB através do comprimento e espessura da área re-epitelizada, análise de permeação cutânea através de espectroscopia fotoacústica, quantidade de células em metáfases e fibras colágenas (tipo I e III). As cascas da droga vegetal apresentaram valores de PD=8,25%, TC=8,66%, TE=7,59%, TR1=10,90%, TR2=9,83% e TR3=14,0%. O teor de TT foi determinado nas amostras: EB=16,80%, FAE=18,62%, FQ=10,27%, F1=28,23%, F2=20,02%, F3=30,40%, F4=40,92% e F5=23,05%. A capacidade antioxidante das amostras foram: EB=7,40, FAE=4,90, FA=9,57, F1=2,95, F2=3,95, F3=4,10, F4=2,38, F5=4,42 e padrões Trolox=3,97 e Vitamina C=4,36. As frações F1 e F4 apresentam IC50 menor que o Trolox e F1, F2, F3 e F4 menores que a Vitamina C (P<0,05). No desenvolvimento de metodologia analítica todas as especificações da RE n° 899/2003 foram cumpridas. A avaliação da atividade cicatrizante mostrou a formação de uma área re-epitelizada maior aos 4 dias e mais espessa aos 10 e 14 dias, assim como a estimulação da maturação das fibras colágenas (tipo I) aos 10 dias e da proliferação celular das metáfases aos 4 e 7 dias. As análises do controle de qualidade cumpriram as especificações farmacopeicas. As frações (F1-F5) apresentaram maior teor de TT e consequentemente maior capacidade antioxidante que o EB e FAE. No desenvolvimento da metodologia analítica comprovou-se que o método para determinação do teor de polifenóis totais do EB é válido e confiável, devendo se utilizar o pirogalol como padrão. Na avaliação da atividade cicatrizante, comprovou-se a permeação do EB em todos os tempos analisados e que o gel contendo EB mostrou ação sobre o reparo tecidual, fornecendo condições que favorecem uma cicatrização mais rápida e resistente aos 14 dias de tratamento, em relação ao controle.
Palavras-chave: Caesalpinia peltophoroides, Polifenóis, Atividade Antioxidante, validação por espectroscopia UV/VIS, Atividade cicatrizante.
Title: Quality control, development of analytical methodology and evaluation of the healing activity of Caesalpinia peltophoroides BENTH
Abstract: Caesalpinia peltophoroides, known as sibipiruna, is a widely used plant in Brazilian cities for afforestation. This work conducted a pharmacognosy study, antioxidant capacity and tannin content of the crude extract (CE) and semipurified fractions (EAF, AF and F1-F5), the analytical methodology development using a spectrophotometer UV/VIS, beyond evaluating the healing activity of the bark of crude extract of C. peltophoroides in Wistar rats skin wounds. The quality control was performed by loss on drying (LD), ash content (AC), extractives content (EC) and dry content with alcohol 100% (DR1), alcohol 70% (DR2) and alcohol 50% (DR3). The total tannins (TT) content was used the reaction with Folin- Ciocalteu. The antioxidant capacity was determined by DPPH assay, determining the IC50 (μg/mL). The analytical methodology development followed the requirements demanded by RE nº 899/2003-ANVISA. The wound healing activity was analyzed at 4, 7, 10, and 14 days of treatment with gel containing 1% of the CE, through the length and thickness of reepithelialized area, photoacoustic spectroscopy permeation analysis, number of cells in\ metaphase and collagen fibers (type I and III). The bark of the vegetal drugs showed values of LD=8,25%, AC=8,66%, EC=7,59%, DR1=10,90%, DR2=9,83% and DR3=14,0%. The TT content was determined in the samples: CE=16,80%, EAF=18,62%, AF=10,27%, F1=28,23%, F2=20,02%, F3=30,40%, F4=40,92% and F5=23,05%. The samples antioxidant capacity tested were: CE=7,40, FAE=4,90, FA=9,57, F1=2,95, F2=3,95, F3=4,10, F4=2,38, F5=4,42, and standards Trolox=3,97 and Vitamin C=4,36. F1 and F4 demonstrated a IC50 lower than Trolox and F1, F2, F3, and F4 lower than Vitamin C (P<0,05). In the analytical methodology development, all the specifications of RE nº 899/2003 were applied. The wound healing activity evaluation showed the formation of a bigger re-epithelialized area in 4 days, and thicker in 10 and 14 days, as well as the stimulation of maturation of collagen fibers (type I) in 10 days and metaphases cell proliferation in 4 and 7 days. The quality control tests were in according with the pharmacopoeic specifications. The fractions (F1-F5) showed a higher amount of TT and therefore a higher antioxidant capacity than the CE and EAF. The analytical methodology development it has been proved that the method for determining the total polyphenol content in CE is valid and reliable, and pyrogalol may be used as standard. In the wound healing activity evaluation, the permeation of the CE was proved in all analyzed times and the gel containing CE showed action on the tissue repair, providing conditions that favor a faster and resistant healing in14 days of treatment, compared to the control.
Keywords: Caesalpinia peltophoroides, Polyphenols, Antioxidant capacity, analytical Methodology development using a spectrophotometer UV/VIS, Wound healing.
Dissertação PDF: clique aqui
